Estudio molecular de arañas del género Cupiennius del sureste de México: DNA barcoding y peptide mass fingerprinting / Montserrat Padilla Villavicencio

Tesis Maestría en Ciencias en Recursos Naturales y Desarrollo Rural El Colegio de la Frontera Sur 2023

Bibliografía: hojas

Anexos: hojas 54-84

Resumen.. Introducción.. Morfología general de las arañas.. Biología de las arañas y su importancia ecológica.. Familia Trechaleidae y el género Cupiennius.. Cupiennius chiapanensis.. Información genética para la identificación de arañas.. Veneno de arácnidos y sus componentes moleculares.. Toxinas.. Péptidos.. Importancia del veneno en arañas.. Marco teórico.. Estudios sobre el género Cupiennius.. Justificación.. Preguntas de investigación.. Hipótesis.. Objetivos.. Objetivo general.. Objetivos específicos.. Materiales y Métodos.. Sitios de colecta de las especies del género Cupiennius en Chiapas y Veracruz.. Identificación taxonómica de los ejemplares.. Identificación molecular de las especies.. Obtención del marcador molecular citocromo oxidasa I o COI.. Amplificación del gen mitocondrial COI mediante PCR punto final.. Clonación de los productos purificados de PCR.. Análisis bioinformáticos.. Obtención del veneno de las especies de Cupiennius.. Caracterización de los venenos de Cupiennius.. Electroforesis SDS-PAGE.. Cromatografía Líquida de Alta Resolución y Espectrometría de masas.. Actividad biológica del veneno y componentes del veneno de Cupiennius.. Resultados.. Identificación y colecta de ejemplares Cupiennius.. Código de barras de DNA y filogenia molecular.. Red de haplotipos y diversidad genética.. Obtención y análisis del veneno de C. chiapanensis y C. salei.. Actividad tóxica en insectos y ratones.. Discusión.. Conclusiones.. Referencias.. Anexos

Las especies del género Cupiennius son arañas errantes pertenecientes a la familia Trechaleidae. Algunas especies de este género han sido ampliamente estudiadas en su distribución, biología sensorial y la caracterización de los componentes del veneno. Sin embargo, existen varias especies que no han sido caracterizadas molecularmente. Este trabajo generó información de las especies Cupiennius chiapanensis y Cupiennius salei del sur de México. Un total de 88 ejemplares fueron colectados e identificados morfológicamente en diferentes ecosistemas de los estados de Chiapas y Veracruz. Los sitios de colecta incluyen vegetación de bosque de manglar y palmar (sabal palmetto Woodland), selva alta perennifolia (bosque tropical), vegetación secundaria y una zona agrícola (cultivo de banana). Los resultados permitieron generar el primer reporte de código de barras de DNA de especies del género Cupiennius de América del Norte (México). Las secuencias correspondientes al gen mitocondrial coxI (COI) permitieron el análisis filogenético de especies colectadas y mostraron sus relaciones con otras especies del género. El análisis de las secuencias de C. chiapanensis mostró una identidad de 94% con C. salei. Mientras que C. salei obtuvo un porcentaje de identidad mayor de 94% con respecto a ejemplares de la misma especie distribuidos en América Central y América del Sur. El veneno de ambas especies se obtuvo mediante estimulación eléctrica de los especímenes. El veneno fue separado por cromatografía (HPLC) y las fracciones obtenidas fueron analizadas mediante espectrometría de masas, generando un peptide mass fingerprinting. Dos de las fracciones obtenidas fueron nuevamente purificadas y se obtuvo la secuencia de aminoácidos de dos componentes del veneno de C. chiapanensis llamados ChiaTx1 y ChiaTx2. Los resultados presentan el primer reporte de secuencias de COI lo que permitió generar el código de barras de DNA en especies de Cupiennius distribuidas en América del Norte (México). Además, se encontró que los nuevos componentes de veneno de C. chiapanensis presentan actividad toxica, la cual es similar a las toxinas del veneno de C. salei. spa

Biotecnología Ambiental